+31(0) 294 48 42 44 - +32 (0) 50 61 10 41 info@oralcomp.com

Real-time PCR methode

Om bacteriën aan te tonen maken we bij Advanced Dental Diagnostics gebruik van de real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) methode. Met deze methode is het mogelijk om bacteriën te identificeren, het DNA van de bacteriën wordt vermenigvuldigd en tegelijkertijd gekwantificeerd. Met behulp van de PCR reactie is het mogelijk om een specifiek stuk DNA te vermenigvuldigen. De reactie bestaat uit drie fasen, namelijk: denaturatie (splitsen van het DNA), hybridisatie (hechten van de primers) en elongatie (het aanbouwen van de DNA-strengen). Elke fase vindt plaats bij een andere temperatuur. In het filmpje zijn deze stappen zichtbaar gemaakt. Deze stappen worden een aantal malen herhaald (30-40 maal) en op deze manier zal het specifieke stuk DNA exponentieel groeien, waardoor er snel een meetbare hoeveelheid DNA verkregen wordt. Met de real-time PCR methode kan tijdens de reactie het DNA al aangetoond worden. Dit gebeurt met probes die een lichtsignaal afgeven als ze hechten aan een specifiek stuk DNA. Hoe meer DNA wordt vermenigvuldigd, des te meer signaal gemeten zal worden. Het signaal wordt vergeleken met standaarden, waarvan de hoeveelheid DNA bekend is. Op deze manier kan de hoeveelheid bacteriën in het monster worden berekend.

De uitslag van deze methode wordt niet beïnvloed door de duur en de omstandigheden van het transport van het monstermateriaal, aangezien het niet uitmaakt of bacteriën dood of levend in het laboratorium worden ontvangen. Het DNA van bacteriën is lange tijd stabiel.

Daarnaast is deze methode zeer snel, nauwkeurig en zeer specifiek.

Principe real-time PCR

Afbeelding van het real-time systeem

Vrijkomen lichtsignaal van de probe